ポリクローナル抗体のエピトープ解析

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ポリクローナル抗体は、幾つものモノクローナル抗体が混ぜ合わさったものですから、わざわざエピトープマッピングをする意味がありません。しかし、抗血清をあえてエピトープ解析すると面白い結果が得られます。抗ユビキチン抗体の例を紹介しましょう。   ユビキチンは７６アミノ酸残基の小さなたんぱく質ですが、生物種間での配列保存性が高く、純度の高い市販品が手に入ります。これをウサギに免疫して抗血清を取得します。７６残基の配列を１５残基前後に分割して一部をオーバーラップさせたペプチドを用意します。１０個ほどのペプチドです。 これらペプチドをキャリアたんぱく質を介してニトロセルロース膜に固定し、ドットブロット法で段階希釈した抗血清を調べます。結果は、 C 末端と中ほど部分のペプチドが比較的強く染まり、その他はうっすらとスポットが見えます。これが何を意味するかというと、２箇所の部分がエピトープになりやすいということです。 すなわち、このような実験データを積み重ねていくことによって、エピトープの推定が可能となるわけです。大きなたんぱく質でも ORF から抗体ができやすい領域を推定し、良い抗体を得ることができるわけです。溶液中のたんぱく質がどのような構造を取っているかで抗体の出来やすさはある程度予想できるので立体構造情報は重要です。そして、エピトープ解析を始めとするウエットな実験結果が裏付けしてくれると、予想の確度は高くなります。詳しくは拙著『抗ペプチド抗体ベーシック』をご覧ください。