生体サンプルを SDS ポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-PAGE)にかけて膜に転写し、抗体で解析することは多々あると思います。このイムノブロット法は、抗体を活用するための基本的方法のひとつですが、難しいと敬遠される方もおられます。それは、実験操作の煩雑さだけでなく、何箇所か失敗しそうなステップを通らなければならないからです。それから自動化が難しいことも理由の一つです。
イムノブロットあれこれ、その 2. サンプル調製と保存、いかに抗原性を保つか
- カテゴリ: 抗体よもやま話
抗体よもやま話
著者： 大海 忍
このセクションは、元・東京大学医科学研究所 疾患プロテオミクスラボラトリ 准教授 大海 忍 先生による抗体入門講座です。
抗体に関する様々な話題や抗体実験で注意すべき点などを分かりやすくご紹介します。
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【大海 忍 先生 ご略歴】
1977年 東京大学理学部物理学科卒業
1978年 聖マリアンナ医科大学研究員
1983年 東京都臨床医学総合研究所 技術員
1987年 東京大学医科学研究所 助手
1992年 東京大学医科学研究所 助教授(准教授) 疾患プロテオミクスラボラトリ
2015年 バイオアソシエイツ株式会社 科学顧問に就任
【主な著書】
抗ペプチド抗体実験プロトコール（秀潤社）
細胞工学連載：ラボラトリーひとくちメモ（秀潤社）
抗ペプチド抗体ベーシック 立体構造情報から抗原を設計する（細胞工学 別冊）
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RE: Anti-β-Actin pAb-HRP-DirecT
3 週間前
ご質問ありがとうございます！ Quoted from ohmiS on 2021年08月28日（土） リプロービングは具体的にどのような方法でされていますか？ リプロービングにはTaKaRaのWestern BLoT Stripping Buffer(#T7135A)を使用しています。 化学発光後のメンブレンを TBS-T 15min wash → Str...
RE: Anti-β-Actin pAb-HRP-DirecT
4 週間前
リプロービングは具体的にどのような方法でされていますか？ jQuery( document ).ready(function() { jQuery(".magnific_popup").magnificPopup({ type: "image", enableEscapeKey:true }); });...
RE: Anti-His-tag mAb-HRP-DirecT
2 月前
抗His-tag抗体です．一次抗体がHRP標識されているので二次抗体反応の必要がなく，短時間で結果が得られます． pETベクターで発現させた大腸菌ライセートをSDS-PAGEで分離し，タンク法でブロッティングした後，0.5%Skim milk（Morinaga）in TTBS(0.2% Tween 20)でブロッキングし，TTBSで３回洗浄後，TTBSで5,000倍希釈して1時間反応．TTBSで...
RE: Anti-His-tag mAb-HRP-DirecT
2 月前
抗HAタグ抗体です。HRPが結合しているので二次抗体と反応させる必要がありません。従って、タンパク質をブロッティングしたメンブレンを１時間ブロッキングした後、抗体反応１時間と洗浄でECLで検出できるので、短時間で結果が得られます。カタログどおり5000倍希釈で検出可能です。10000倍希釈はバンドが薄すぎて、良い結果が得られませんでした。モノクローナル抗体なのでバックグラウンドはほとんどありません...
RE: Tau Monoclonal Antibody (TAU-5)
2 月前
total tauの検出でどこが認識されているのか少し気になったので、調べてみました。 抗体情報を調べてみると、Abcam社のTau-5のwebsiteでは、 Full length native protein (purified) corresponding to Cow Tau. Purified bovine microtubule-associated proteins. と記...
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